Products

Ut plures metabolitas 5-fluorouracil (5-FU) et duos nucleotides endogenosos monophosphas nucleotides specifice quantitaremus, methodum originalem secundum chromatographiam liquidam-tamdem massam spectrometriae (LC-MS/MS) evolvit.Hoc incassum permisit determinationem: (i) productionem intracellularem 5-fluoro-2′-deoxyuridinem-5′-monophosphatam (5-FdUMP) ab 5-FU vel 5-fluoro-2′-deoxyuridine (5-FdUrd) (ii) impulsum 5-FdUMP concentuum intracellulares 2′-deoxyuridinem 5′-monophosphatem thymidinem-5′-monophosphatem (TMP) rationis et (iii) extensionem secretionis 5-FdUMP et 5-FU ex humano cellulis excultis ab transportandis ABC.Sub conditionibus experimentalibus nostris cellae 5-FU vel 5-FUrd incubatae sunt.Tum cellulosi a methanolo praecipitati sunt.Haec ratio provisum est princeps recuperatio extractionem.Praeterea, ut 5-FU et 5-FdUMP secretionem e cellulis metirimus, quantitatem harum moleculorum in cultura mediante peregimus.Media vel directe injecta sunt (5-FU) vel sub accessione solidi temporis extractio utens Oasis Cera cartridge extractionis (5-FdUMP).Separatio analytorum fiebat in dC18 Atlantis 3.5 µm, (100 mm × 2.1 mm id) columna cum modo isocratico utens ammonium formato quiddam/methanol/aquarum (5/5/90, v/v) ut phase mobile.Tempus procursum 6.2 min non excessit.Analytae ionized sunt in interface electrospray sub modo ion negativo.Methodum convalidavimus per amplitudinem 2.5-150 ng mL −1 secundum compositiones.Intra- et inter-assamentum variabilitas minor quam 10% supra septem dies erat.Omnia composita in cellis vel in medio culturae stabilia erant, cum exemplaria ad −20 °C saltem per duas septimanas condita erant, et post tres cyclos congelatos ungulae.Nullus matrix effectus in utroque instrumento servatus est.