nuntium

IPTG (isopropyl-β-D-thiogalactosi) analogum subiectae aba-galactosidas, quod valde inducibile est.Sub inductione IPTG, inductor implicatum cum interdum repressore formare potest, Ut forma repressoris interdum mutetur, ut cum gene clypeo componi nequeat, et scopo gene efficienter exprimatur.Quomodo igitur per experimentum determinari debet intentio IPTG?An melior sit maior?
Primum, principium inductionis IPTG intelligamus: E. coli lactosum operonis (elementum) tres continet genes structurales, Z, Y et A, quae encode β-galactosidase, permeas et acetyltransferas, respective.lacZ lactosum in glucose et galactose, vel in allo-lactosum;lactosum lactosum in ambitu per membranam cellam transire et cellam intrat;lacA transfert coetus acetyl-CoA ab acetyl-CoA ad β galactoside, quod involvit removendo effectum Toxicum.Adde sequentiam operantem O, sequens P principium et gene regulatorium I. In codice gene I est interdum repressor qui ad positionem O sequentis operantis ligare potest, ita ut operon reprimatur ac reprimatur. avertit.Est etiam ligamen situs generum catabolicorum activorum interdum-CAP ligamen situs fluminis initiationis P. Sequentia, O series, CAP ligamen situm simul constituunt regulatorem regionis operonis laccae.Genes codingum trium enzymorum ab eadem regione regulatoriae regulantur ad expressionem gene productorum ordinatam consequendam.

Lactoso absente, lac operon est in statu reprimendi.Hoc tempore, lac repressor per I seriem expressus sub potestate fautoris PI sequentis ligat ad seriem O, quae prohibet RNA polymerasium ligare ad P sequentiam et initiationem vetat transcriptionem;cum lactosum adest, lac operon induci potest In hoc operon systemate, inductor realis non est ipsum lactosum.Lactosum cellulam intrat et ab β-galactosidase ad allolactosos convertendos catalyzatur.Posterior, ut moleculae inducens, obligat interdum ad repressorem et conformationem interdum mutat, quae ducit ad dissociationem interdum repressoris ex O serie et transcriptione.Isopropylthiogalactosides eundem effectum habet ac allolactosos.Plurimum inductorium est, quod per bacteria metabolum non est et valde stabilis est, ut late in laboratorio usus est.

Quomodo determinare rectam intentionem IPTG?Accipe exemplum E. coli.
Coli BL21 cola generatim machinatum continens positivum recombinantem pGEX (CGRP/msCT) in medium liquidum LB continens 50µg·mL-1 Amp, et excultum pernoctare ad 37°C.Superior cultura inoculata erat in 10 utres 50mL recens LB medium liquidum continens 50µg·mL-1 Amp ad rationem 1,100 ad culturam expansionem, et cum valor OD600 erat 0.6~0.8, IPTG ad ultimam intentionem accessit.Est 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 1.0mmol·L-1.Post inductionem eodem temperie eodemque tempore 1 mL solutionis bacterial ex eo ablata est, et cellulae bacteriales centrifugatione collectae et SDS-Paginae subiectae sunt ut influxum diversorum IPTG concentrationis interdum expressionis interdum resolveret, ac deinde select the IPTG concentration with the largest protein expression.
Post experimenta, invenietur intentio IPTG quam maxima non esse.Causa est, quia IPTG quamdam toxicitatem ad bacteria habet.Nimia intentio occidet etiam cellam;et generaliter loquendo speramus, dapibus magis solutum in cella melius expressum, sed in multis casibus, cum nimia altioris intentionis IPTG copia formabitur inclusio.Corporis, sed dapibus soluta moles.Aptissima igitur intentio IPTG est saepe non melior eo maior, sed intentio inferior.
Propositum inductionis et culturae modorum generum machinatorum est augere interdum cessum scopum et gratuita reducere.Locutio scopo gene non solum afficitur propriis factoribus et expressionibus plasmidis, sed etiam ab aliis condicionibus externis, sicut de intentione inducentis, inductionis temperie et inductionis tempore.Itaque generatim, antequam dapibus ignotus exprimitur et purificatur, optimum est ad tempus inductionis, temperationis et intentionis IPTG studere, ut condiciones opportunas eligere et optimos eventus experimentales consequantur.